液相色譜柱使用的注意事項

使用液相色譜柱做HPLC分析時，通常會遇到一些問題，下面為大家介紹幾點液相色譜柱使用的注意事項：

 

1、避免壓力和溫度的急劇變化及任何機械震動

溫度的突然變化或者使色譜柱從高處掉下都會影響柱內的填充狀況；柱壓的突然升高或降低也會沖動柱內填料，因此，在調節流速時應該緩慢進行，在閥進樣時閥的轉動不能過緩。

 

2、應逐漸改變溶劑的組成

特別是反相色譜中，不應直接從有機溶劑改變為全部是水，反之亦然。

 

3、一般說來色譜柱不能反沖

只有生產者指明該柱可以反沖時，才可以反沖除去留在柱頭的雜質。否則反沖會迅速降低柱效。

 

4、選擇使用適宜的流動相(尤其是pH)，以避免固定相被破壞。

有時可以在進樣器前面連接一預柱，分析柱是鍵合硅膠時，預柱為硅膠，可使流動相在進入分析柱之前預先被硅膠“飽和”，避免分析柱中的硅膠基質被溶解。

 

5、經常用強溶劑沖洗色譜柱，清除保留在柱內的雜質。

在進行清洗時，對流路系統中流動相的置換應以相混溶的溶劑逐漸過渡，每種流動相的體積應是柱體積的20倍左右。